primer5注册机（primer5）

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1、如果是在PCR产物两端加上酶切位点，则可以在正向与反向引物的5撇端加上，加啥碱基，就要看你要加的酶所识别的碱基序列，然后在再酶切位点前加上2-3个保护碱基，保护碱基也是根据不同的酶加不同的保护碱基，这些你都可以在网上搜索到的。

2、不管加几个酶切位点都必须在引物的5撇端加，因为引物扩增的方向是从3撇端开始的。

3、正确的引物顺序是 5-XX（保护碱基）+XXX（酶切位点）+引物序列-3。

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